基因敲除(geneknocko来自ut),是指对一个结构已知但功美切买投能未知的基因,从分子水平上设计实验,将该基因去除,或用其它顺序相近基因取代,然后从整体观察实验动360问答物,推测相应基因的功能。这与早期生理学研究中常用的切除部分-观察整体-派语承件江推测功能的三部曲思想相似。
基因敲除除可中止某一基因的表达外,还包括引入新基因及引入定点突变。既可以是用突变基因或其它基因敲除相应的正常基因,也可以用正常基因敲除相应的突变它消座效厂新族基因。基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展燃非格图起来的一门新技术谁概连路。80年代初,胚胎干细胞(ES细胞)分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。1985年,易特弦逐属首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到1987年,Thompsson首次建立了完整的绍罗讨目降局除视样白怕ES细胞基因敲除的小鼠模型。此后的几年中,基因敲除技术得到了进一步的发展和完善。
基因敲除的技术路线如下:
(1)构建重组基因载体﹔
(2)用电穿孔、显微注射等方法把重组DNA转入受体细胞核内﹔
(3)用选择培养基筛选已击中的细胞﹔
(4)将击中细胞转入胚胎使其生长成为转基因动物,对转基因动物进行形态观波歌里察及分子生物学检测。
基因敲除的靶称重五料官欢冲渐居细胞目前最常用的是小鼠ES细胞。基因敲除的技术路线虽不复杂,但由于高等真核细胞内外源DNA与靶细胞DNA序列自然发生同源重组的机率非常低,约为百万分之一,要把基因敲除成功的细胞筛选出来是一件非常困难的工作。因此,同源重组的筛选和检测就成了基因敲除技术所要解决的关键问题。目前已有多种筛选方法,其中1988年犹它大学的Capecchi教授的研究组发展的正负双向选择系统适用范围宽且效率较高。