PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性务尔冲牛传比依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
PCR是一种体外DNA扩增技术,是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于DNA聚合酶的酶促合反应,将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火——引物延伸”三步反应的多次循环,使DNA片段在数量上呈指数增加,从而在短时间内获得我们所需的大量的特定基因片段。
PCR扩增仪
在环境检测中,靶核酸序列往粒配维率担往存在于—个复杂的混合物如细胞提取液中,且含量很低,对于探测这种复杂群体微中的特异微生物或某叶过队观始牛乎律板派圆个基因,杂交就显得不敏感。使用PCR技术可将片占此也查字父靶序列放大几个数量级采,再用探针杂交探测对被扩增序列作定性或定量研究分析微生物群体结构。PCR技术常与其他技术结合起来使用,如RT-PCR、竞争PCR、巢式PCR、RAPf)、ARDRA等。
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竞争性PCR是一种定量PCR,通过向PCR反应体系中加入人工构建的带有突变的竞争模板、控制竞争模板的浓度来确定目的模板的浓度,对目的模板作定量假站控独微体传玉氢观今研究。
将PCR技术和限制酶切技术结合使用,用限制酶酶切目的基因的PCR扩增产物,通过对酶切产物的分析,探测该基因的多态性。
RAPD(randomlyamplifiedpolymorphicDN担征述区A,RAPD)也是应用富万计很系结又王呼身算比较广泛的一项技术。RAPD是用那些对某—特定养械农基因的非特异性的非卷文伤连叫搞晚探临倒引物来扩增某些片段。RAPD分析用于探测含有混合微生物种群的各种生物反应器中的微生物多样性。用RAPD分析所得到的基因组指纹图谱在比较一段时间内微生物种群的变化以及比较小试规模和中试规模的反应器方面是有用的,但还不足以军仅增子银设组杆于决我用来估测群落的生物多样性。